C概念:
A 生物反应器 是利用酶或生物体(微生物)的生物学功能在体外进行生化反应的装置系统。它是一种天然的功能模拟器,如发酵罐、固定化酶或细胞反应器等。在酿酒、药品生产、浓缩果酱、果汁发酵、有机污染物降解等方面有着重要的应用。
第1部分 基本原则
生物反应器 听起来可能很陌生,但基本原理非常简单。胃是人体内处理食物的复杂生物反应器。食物在胃里被各种酶消化,变成我们可以吸收的营养物质。生物工程中的生物反应器是通过模拟体外生物体的功能来生产或检测不同化学物质的反应装置。换句话说,生物反应器是利用酶或生物体(如微生物)的生物过程在体外进行生化反应的装置系统。它是一种天然的功能模拟器,如发酵罐、固定化酶、细胞反应器等。
Based on the widespread use of immobilized enzymes, people have discovered that natural cells have multifunctional serial reaction systems. Immobilizing cells using physical or chemical methods is a shortcut to using enzymes or enzyme systems. An immobilized cell reactor is like a “life activity function promoter.” Immobilized cell technology began in the 1970s, and its practical application has exceeded that of immobilized enzymes. For example, the United States, Europe, and Japan all use the immobilized bacterial column bed process to produce high-fructose syrup on a large scale.
第2部分 输卵管
1993年,英国罗斯林研究所的桑博士研究了家禽蛋黄表达系统,在鸡蛋的蛋黄中表达了外源蛋白。由于卵黄蛋白是肝细胞表达的蛋白质,且含量不高,1994年,中国科学院微生物研究所副秘书长、中国转基因动物学会(筹)曾(杰)邦哲)等人提出了家禽转基因输卵管生物反应器,这是国际上第一个利用蛋清蛋白基因侧翼序列表达外源药用蛋白的研究。
Transgenic Animal Newsletter in November 1994 (Glodegg Plan), March 1995 and 1996, the First International Biotechnology and Drug Academic Seminar and Exhibition in Shanghai in July 1995, the 1st and 3rd International Biotechnology and Drugs Exhibition in Beijing in November 1996 The National Academic Symposium on Genetically Modified Animals (Secretary-General Zeng Bangzhe), the 1997 Biotechnology Bulletin, and the creation of the term “oviduct bioreactor” and the system bioscience and engineering website created in Germany in 1999 The concept, methods and technical research of oviduct bioreactor were expounded.
1996年创办第一届国际转基因学术研讨会期间,曾邦哲联系了加拿大、美国、英国、日本等国家的相关转基因家禽实验室。尽管如此,这是第一次有人进行这个课题。随后,他联系了美国Avigenics公司和佐治亚大学R. Ivarie教授讨论了输卵管生物反应器的合作研究。
1998年,美国艾维基因公司因中国科学家曾邦哲远赴以色列,独立进行了输卵管生物反应器的大规模投资和研发。 2002年以后,国际国内掀起了输卵管生物反应器研发热潮。 2003年,《科学》杂志发表了一篇关于金蛋的评论文章。
世界上已经有十几家有前途的公司正在开发利用输卵管生物反应器的产品。英国罗斯林研究所也在2003年成立了公司,由桑博士主持研究项目,研究项目从禽类蛋黄表达系统转向输卵管。生物反应器。输卵管生物反应器将被称为继哺乳动物乳腺生物反应器之后最有前途的动物生物反应器。
第三部分 基因构建
以合理的成本获得大量人体内稀有的血浆蛋白在不久前还只是一个幻想。然而,生物学和分子生物学的最新进展终于使这一幻想成为现实。其中,利用显微技术将外源DNA注射到生殖细胞原核、将重组DNA转移到小鼠胚胎细胞、将DNA整合到宿主染色体并进行种系传递、利用转基因(Tg)动物生产药用蛋白等重要发现成为可能。 。此外,卵细胞DNA的获取、操作、再植入、重组等生物技术的发展,保证了转基因动物生物反应器的成功。一般来说,在转基因动物生物反应器中生产药用蛋白有两种技术路线。首先是在同源组织中表达目的基因的蛋白;二是将目的基因构建成杂交基因,转入动物胚胎,通过转基因动物的分泌器官收集、纯化药用蛋白。转基因动物分泌的蛋白质经过加工,类似于天然人类蛋白质的结构,具有完全相似的生物活性。
第四部分 同源组织
在同源组织中表达蛋白质最典型的例子是在动物红细胞中表达人血红蛋白。在人血红蛋白基因编码序列中,启动子有两个CACCC盒,而相应的猪启动子只有一个,靠近它的另一个是CGCCC盒。夏尔马等人。 [1]将猪β启动子与人β编码基因融合,并将人β位点调节区(β-LCR)和α、ε基因与融合基因的β基因连接起来。将该载体转入猪胚胎细胞,转基因猪分泌乳汁中获得的重组人血红蛋白含量高达32g/L。
第五部分 蛋白质生产
转基因动物表达重组蛋白,主要针对乳腺、唾液腺和膀胱。在这些表达器官中,通过构建合适的载体并选择合适的启动子和调控序列,可以以远高于正常水平产生重组蛋白。但生产系统应尽可能与循环系统隔离,以减少表达产物对宿主动物的影响。
第6部分 乳腺生物学
将所需的目的基因构建成载体,加上适当的调控序列,转入动物胚胎细胞中,使转基因动物分泌的乳汁中含有所需的药用蛋白。从将融合基因移入胚胎细胞到收集蛋白质有一个过程,包括胚胎植入、分娩和转基因动物的生长。转基因动物从出生到第一次泌乳,猪、羊、牛分别需要12、14、16个月,只有雌性动物泌乳不连续,一般持续2、6、10个月。牛、羊等大型牲畜可以正确地对药用蛋白进行后处理,使其具有较高的生物活性。同时,它们产生大量的乳汁,并且易于大规模建造,使它们成为乳腺生物反应器的理想动物类型。
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